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Étalonner le micromètre
oculaire
Pour mesurer les dimensions des structures observées
(spores, asques, épihyménium…), on place, au niveau du diaphragme
fixe de l'un des oculaire, un disque transparent portant une échelle
munie de 100 graduations. Ce disque d'oculaire est vendu comme
accessoire et doit être commandé en même temps que le microscope.
Son diamètre correspond au diamètre intérieur de l'oculaire (environ
21 mm mais cela peut varier selon les constructeurs).
L'oculaire qui porte cet accessoire est appelé oculaire
micrométrique.
Remarque : Si vous achetez un oculaire micrométrique
différent de celui qui équipait votre microscope, il y a de très
grandes chances pour que deux images ne puissent pas fusionner
parfaitement. On doit dans ce cas utiliser l'oculaire micrométrique
uniquement pour réaliser les mesures puis remettre l'oculaire
initial pour rétablir la vision binoculaire nettement plus
confortable et moins fatigante pour les yeux.
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(1)
L'échelle du disque oculaire, divisée en 100 parties égales,
forme le micromètre oculaire ; (2) La lame micrométrique
porte un segment de 1mm, le micromètre objet, divisé
en 100 parties égales (3) ; 2 traits consécutifs sont
séparés par 10 µm. |
Pour évaluer
les longueurs il faut étalonner cet oculaire pour chacun des
objectifs du microscope ; savoir à quelle longueur en µm correspond
la distance entre deux graduations successives. On utilise une
préparation microscopique particulière appelée lame micrométrique ou
micromètre objet qui porte un segment de 1 mm de longueur divisé en
100 parties égales.
Sur la lame micrométrique, 100 graduations = 1 mm = 1000 µm
Þ entre 2 graduations successives du micromètre objet, il y
a donc 10 µm
On
place le micromètre objet sur la platine et on l'observe avec
l'oculaire micrométrique. On fait la MAP puis en déplaçant la
préparation micrométrique on fait coïncider le zéro du micromètre
oculaire avec le zéro du micromètre objet. Il suffit de lire le
nombre de µm qui correspond aux 100 gradations du micromètre
oculaire (celui qui bouge quand on fait tourner l'oculaire).
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Au
grossissement 400 (10x40) les 100 graduations du micromètre
oculaire (M) correspondent à 25 divisions (soit 250 µm) du
micromètre objet ; entre 2 graduations de l'oculaire
micrométrique il y a donc 2,5 µm. |
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Au
grossissement 200 (10x20) les 100 graduations du micromètre
oculaire correspondent à 50 divisions (soit 500 µm) du
micromètre objet ; entre 2 graduations de l'oculaire
micrométrique il y a donc 5 µm. |
Autre
exemple : au grossissement 1000 (10x100) les 100 graduations du
micromètre oculaire correspondent à 8,3 divisions (soit 83 µm) du
micromètre objet ; entre 2 graduations de l'oculaire micrométrique
il y a donc 0,83 µm. Une spore mesurant 17 graduations aura donc
pour taille 17 x 0,83 = 14 µm.
Au
grossissement 1000, si les 100 divisions du micromètre oculaire
correspondent à 10 divisions (soit 100 µm) du micromètre objet, ce
qui correspond au cas idéal, entre 2 graduations de l'oculaire
micrométrique il y a donc 1 µm.
Les
valeurs trouvées pour chaque objectif sont reportées sur un petit
morceau de papier scotché sur le microscope. Il suffit ensuite de
faire les mesures et de multiplier par le coefficient préalablement
trouvé.
Spores uniguttulées de Geopora arenicola de 21 µm de longueur
(Montage dans le Rouge congo SDS x1000)
Remarque : le micromètre objet ne sert qu'une seule fois, lors de
l'étalonnage du micromètre oculaire. Pour éviter son achat on peut
l'emprunter lors d'un stage au cours duquel de nombreux
microscopistes sont présents et pourront utilement vous conseiller.
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