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La conservation des préparations
Lorsqu'on a passé beaucoup de temps sous la loupe
binoculaire à réaliser des coupes, à utiliser divers produits pour
les colorer et que le résultat obtenu semble satisfaisant, le besoin
de conserver les préparations microscopiques pour une observation
ultérieure est indéniable.
Se pose alors le problème du choix du milieu de
conservation définitif.
En botanique, les préparations sont
montées dans le baume du Canada ou dans une résine de
synthèse (type Eukitt ou Naphrax...) après séjour dans l'alcool
absolu et le xylène pour éliminer l'eau qu'elles contiennent. Cette
technique n'est pas applicables aux structures fongiques qui ne
supportent pas la déhydratation. Heureusement plusieurs solutions de
conservation en milieu aqueux sont à notre disposition.
a) Le
liquide de Hoyer est un mélange qui permet de conserver
les préparations montées en milieu aqueux. Une goutte de liquide est
placée sur la lame, on y introduit la coupe (préalablement colorée)
à conserver. La coupe est délicatement placée en utilisant sous la
loupe binoculaire des minuties (épingles très fines utilisées par
les collectionneurs de papillons). On place la lamelle qui étale
tout doucement le liquide (ne pas appuyer immédiatement).
Au bout de
quelques jours, la préparation est bordée avec du vernis à ongles
(incolore) pour la rendre étanche, éviter qu'elle se déshydrate et
qu'il y ait entrée de substances qui pourraient attaquer le milieu
de conservation.
Composition du liquide de Hoyer
Eau bidistillée .............................................. 50 mL
Gomme arabique ........................................ 30 g
Chloral hydraté ......................................... 200 g
Glycérine
..................................................... 16 mL
Préparation :
mélanger les 30 g de gomme arabique avec l’eau en agitant. Il faut
ensuite attendre plusieurs jours pour avoir passage de la gomme
arabique en solution. Dissoudre les 200 g de chloral hydraté
(attendre également la dissolution totale). Ajouter finalement la
glycérine.
b) La glycérine
gélatinée souvent choisie pour la conservation de grains de
pollens peut également être utilisée en mycologie et lichénologie. À la température
normale, la glycérine est figée. Dans un verre de montre (ou
directement sur une lame) placé sur une plaque chauffante, la
gélatine glycérinée est chauffée légèrement (80°C) afin qu'elle se
liquéfie. Eviter de remuer pour ne pas apporter de bulles d'air.
La pièce à inclure,
préalablement mise en attente dans le mélange glycérine / eau
(50/50), est placée délicatement dans la gélatine liquéfiée. Il faut
éviter l'apport de bulles d'air qu'il n'est pas possible d'éliminer
par la suite.
Mettre une lamelle.
Laisser refroidir plusieurs heures. Luter avec du vernis à ongle ou
de la peinture à maquette. Cette préparation se gardera plusieurs
semaines (préparation semi-permanente).
Pour avoir une
conservation plus longue il faut introduire du phénol ou du thymol
(Le thymol remplace avantageusement le phénol, il ne dégrade pas
aussi rapidement les colorants et les chlorophylles).
Préparation de la
glycérine gélatinée (selon John White)
Gélatine ........................................ 1 part
Eau bidistillée ................................ 6 part
attendre 2 heures et ajouter :
Glycérine
....................................... 7 part
Thymol (pur) ................................ 1% de la masse totale
c) L'alcool
polyvinylique (PVA) lactophénolé
Ce produit permet de
conserver certaines coupes fixées et colorées en milieu aqueux
pendant quelques semaines à quelques mois.
Préparation selon
Marcel Lecomte (qui nous fournit le PVA lactophénolé)
- Dans un 1er flacon
mettre 56 mL d'eau bidistillée, chauffer au bain-marie pour amener
la T° de l'eau à 80°C ; inclure lentement 8,4 g de PVA en agitant
jusqu'à dissolution.
- Dans un 2ème flacon dissoudre 22 mL (= 26,5 g) d'acide lactique
dans 22 mL de phénol en solution aqueuse saturée (84g/L, à 20°C) ;
s'il reste du phénol non dissous, ajouter au maximum 5 mL d'acide
lactique, afin que le mélange soit bien limpide.
- Refroidir le PVA pour le ramener à 30-35°C et le mélanger au
lactophénol.
Remarque : les
structures colorées au Congo prennent une coloration bleu-noir en
présence de PVA et deviennent presque illisibles (utiliser dans ce
cas le Hoyer ou l'histolaque).
d) L'Aquatex
Ce produit est récemment
apparu sur le marché. Il est fourni en flacons de 50 mL, prêt à
l'emploi.
C'est un milieu de montage
hydrophile pour la réalisation de préparations permanentes ; il
contient des composés capables de polymériser en intégrant la coupe
dans la masse solide finale.
Lors des diverses
opérations il faut absolument éviter l'introduction de bulles d'air
qu'il est impossible de chasser par la suite.
Les résultats obtenus sont
bons mais nous n'avons pas le recul du temps (seulement 2 années)
pour juger avec objectivité du devenir à long terme.
Ce produit est disponible
auprès de l'AFL, en flacon de 10 mL ; il se conserver
deux à tois années en flacons bien fermés.
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