L'utilisation du microscope optique en mycologie et lichénologie
Régler correctement son microscope à fond clair
Jean-Pierre GAVERIAUX

Certains microscopes ne possèdent pas tous les perfectionnements techniques et peuvent être dépourvus de certaines fonctions, les réglages se trouvent alors considérablement simplifiés.

1) Ajuster les oculaires du système d'observation
2) Centrer le condenseur
3) Régler le diaphragme de champ et la hauteur du condenseur
4) Quel condenseur choisir ?
5) Quelle valeur faut-il donner au diaphragme d'ouverture ?
6) Faire la mise au point
7) Étalonner le micromètre de l'oculaire

Remarque : Si vous achetez un oculaire micrométrique différent de celui qui équipait votre microscope, il y a de très grandes chances pour que deux images ne puissent pas fusionner parfaitement. On doit dans ce cas utiliser l'oculaire micrométrique uniquement pour réaliser les mesures puis remettre l'oculaire initial pour rétablir la vision binoculaire nettement plus confortable et moins fatigante pour les yeux.

(1) L'échelle du disque oculaire, divisée en 100 parties égales, forme le micromètre oculaire ; (2) La lame micrométrique porte un segment de 1mm, le micromètre objet,  divisé en 100 parties égales (3) ; 2 traits consécutifs sont séparés par 10 µm.

Pour évaluer les longueurs il faut étalonner cet oculaire pour chacun des objectifs du microscope ; savoir à quelle longueur en µm correspond la distance entre deux graduations successives. On utilise une préparation microscopique particulière appelée lame micrométrique ou micromètre objet qui porte un segment de 1 mm de longueur divisé en 100 parties égales.  

Sur la lame micrométrique, 100 graduations = 1 mm = 1000 µm
Þ entre 2 graduations successives du micromètre objet, il y a donc 10 µm

On place le micromètre objet sur la platine et on l'observe avec l'oculaire micrométrique. On fait la MAP puis en déplaçant la préparation micrométrique on fait coïncider le zéro du micromètre oculaire avec le zéro du micromètre objet. Il suffit de lire le nombre de µm qui correspond aux 100 gradations du micromètre oculaire (celui qui bouge quand on fait tourner l'oculaire).

	Au grossissement 400 (10x40) les 100 graduations du micromètre oculaire (M) correspondent à 25 divisions (soit 250 µm) du micromètre objet ; entre 2 graduations de l'oculaire micrométrique il y a donc 2,5 µm.
	Au grossissement 200 (10x20) les 100 graduations du micromètre oculaire correspondent à 50 divisions (soit 500 µm) du micromètre objet ; entre 2 graduations de l'oculaire micrométrique il y a donc 5 µm.

Autre exemple : au grossissement 1000 (10x100) les 100 graduations du micromètre oculaire correspondent à 8,3 divisions (soit 83 µm) du micromètre objet ; entre 2 graduations de l'oculaire micrométrique il y a donc 0,83 µm. Une spore mesurant 17 graduations aura donc pour taille 17 x 0,83 = 14 µm.

Au grossissement 1000, si les 100 divisions du micromètre oculaire correspondent à 10 divisions (soit 100 µm) du micromètre objet, ce qui correspond au cas idéal, entre 2 graduations de l'oculaire micrométrique il y a donc 1 µm. 

Les valeurs trouvées pour chaque objectif sont reportées sur un petit morceau de papier scotché sur le microscope. Il suffit ensuite de faire les mesures et de multiplier par le coefficient préalablement trouvé.

Spores uniguttulées de Geopora arenicola de 21 µm de longueur
(Montage dans le Rouge congo SDS x1000)

Remarque : le micromètre objet ne sert qu'une seule fois, lors de l'étalonnage du micromètre oculaire. Pour éviter son achat on peut l'emprunter lors d'un stage au cours duquel de nombreux microscopistes sont présents et pourront utilement vous conseiller.

1) Ajuster les oculaires du système d'observation
2) Centrer le condenseur
3) Régler le diaphragme de champ et la hauteur du condenseur
4) Quel condenseur choisir ?
5) Quelle valeur faut-il donner au diaphragme d'ouverture ?
6) Faire la mise au point
7) Étalonner le micromètre de l'oculaire